蘇州方舟基因藥業有限公司
 
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《誘導多能干細胞庫的建立及其在血液病治療方面的應用

研究》項目后期自查及實驗討論會議紀要

    課題負責人:戴衛
    分課題負責人(天津):程濤; 分課題負責人(蘇州): 蔣永平
    與會專家:馬鈺波,丁欣欣,張慶宇,劉日河
    課題實施日期:2011年1月1日至2013年12月31日

    首先,蔣永平博士代表分課題承擔單位蘇州方舟基因藥業有限公司對課題進展情況對國家重大專項辦公室有關負責人做了總結匯報:

    一、 課題考核指標:

    用于規?;票贛盞夾遠嗄芨上赴╥PS)的小分子和SALL4等細胞因子基因工程藥物開發及其應用研究,并以這些小分子和細胞因子基因工程藥物為基礎,進行各種干細胞的擴增?;趇ps在致瘤等方面的風險,越來越多的科學家和臨床醫生開始質疑這一治療途徑,目前國際上對ips的研究趨于保守。針對這種情況,在保持原研究目標不變的情況下,我們及時對研究實施方案進行了調整,以人類臍帶血經過擴增因子藥物作用擴增和定向分化后作為細胞載體治療或移植治療方法,進行血友病和其他血液系統疾病的1-2個臨床前研究,包括以下三個方面:

    1, 相關小分子藥物或SALL4等重組干細胞擴增因子藥物的篩選,并測試其對干細胞擴增的作用;

    2, 運用血友病人的iPS細胞經基因插入糾正該病的遺傳缺陷體外研究;

    3, 進行動物基因治療血友病的前期研究,利用人臍帶組織來源血管內皮細胞移植對小鼠血友病模型的疾病逆轉研究等。

    二、考核指標已完成任務情況:

    1,對照考核指標1,2完成情況

    近期完成了包括基礎培養基配方和優化的細胞生長因子組合配方的研發,并對人源臍帶血造血干細胞、人動員外周血造血干細胞、人骨髓造血干細胞、猴骨髓造血干細胞和猴動員外周血造血干細胞等進行了體外培養擴增, 以驗證其高效擴增的有效性和安全性。以人臍帶血造血干細胞為例,體外培養9天可以實現干細胞增長40倍左右,總有核細胞擴增180倍左右;體外培養16天時, CD34+造血干細胞可增長60左右,總有核細胞擴增可達1800倍左右。為干細胞移植治療和條件性誘導分化成功能細胞用于輸注治療奠定了基礎。除此之外,我們還篩選中藥提取物中可促進干細胞擴增的有效成分, 目前已經對包括人參皂甙、川穹提取物等20多種粗提物開展了篩選工作。 開展了p450細胞色素氧化酶家族基因在干細胞增殖和分化過程中的研究, 以及轉錄因子Sall4B對干細胞的擴增效果。b,同時,我們還利用lenti-sall4b-viral轉染了食蟹猴骨髓來源造血干細胞,在擴增12天可以使CD34+細胞擴增5倍以上, 總有核細胞擴增15倍左右, 與人骨髓來源造血干細胞的體外擴增倍數相當。另外,考慮到慢病毒轉染可能帶來的生物安全性問題, 我們同時進行了在昆蟲細胞中的TAT-Sall4B蛋白純化,復性,以期能夠安全、高效的體外擴增干細胞。

    2、對照考核指標3完成情況

    (1) 人臍帶組織來源血管內皮細胞移植對小鼠血友病模型的疾病逆轉研究:

    通過移植人臍帶組織來源的血管內皮細胞對無胸腺小鼠肝竇內皮損傷進行重建,為進一步研究人源內皮細胞對小鼠血友病的疾病逆轉奠定基礎。該實驗正在進行中,估計十一月中旬將完成,并進行實驗結果數據的分析。

    (2) 猴動員外周血造血干細胞體外擴增后自體移植進行骨髓重建實驗,該實驗正在進行中,估計十二月中旬將完成,并進行實驗結果數據的分析。

    隨后程濤所長匯報了天津血研所過去兩年多的時間中的課題進展狀況。利用三例血友病A患者外周血單個核細胞進行逆向誘導成IPS細胞,經過對凝血因子VIII的外顯子2,和外顯子6的基因測序,發現第43位和第226位的精氨酸突變為絲氨酸。目前這三個細胞系已經分別提供3管給蘇州團隊,將進行進一步的基因糾正、定向誘導為血管內皮細胞并進行分泌凝血因子VIII的功能檢測。

    最后,國家重大專項辦公室有關負責人、項目承擔單位負責人與會專家共同對項目進展情況進行了深入的討論,并對項目具體的實驗細節提出了若干寶貴建議。

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